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    病毒滅活能力試驗懸液該怎么制備?

    更新時間:2021-04-28      點擊次數:2030
      病毒滅活能力試驗是一種十分重要的試驗過程,做病毒的殺滅效果試驗檢測,首先需要根據具體的產品具體的病毒滅活分析,病毒滅活效果驗證,要找可靠具備CMA資質認證的病毒殺滅試驗檢測中心機構。--廣東省華微檢測股份有限公司。
      病毒滅活能力試驗的病毒懸液制備方法?
      1、從液氮中取出冷凍的測試宿主細胞,在37°C的溫水中迅速融化,并使用毛細管吸管將其移植到細胞中含維護溶液的細胞管中,移液幾次以混合,立即離心(3000r/min,3min),并除去上清液。然后添加適當的細胞維持溶液,移液幾次以混合,然后如上所述離心后,轉移到含有10種培養基的培養瓶中。每天觀察細胞生長,并在單層細胞過度生長時將其用于消毒測試。
      2、取出冷凍保存的測試病毒種類,在37°C水浴中融化,用細胞維持液稀釋10倍,然后接種到已生長有單層細胞的細胞瓶中,將其置于37°C的培養箱中,使其吸附并與細胞一起生長。每天觀察病變,并在3/4個細胞病變時收獲病毒。
      3、用聲波(或反復冷凍和融化)破壞含病毒的培養基中的宿主細胞,并在冰浴中破壞宿主細胞以釋放病毒。然后,盡快離心(6000r/min,15min)以除去沉淀物(主要是細胞碎片),上清液即為所需的病毒懸液。每管裝1.0份等分試樣到無菌離心管(1.5)中。
      4、取病毒懸液,并根據病毒滴度確定方法確定病毒滴度。將其余的冷凍并儲存在-80℃下以備后用。
     

    病毒滅活能力試驗

     

      病毒滅活能力試驗的三種原理:
      1、包膜的破壞:包膜中含有脂質,因此包膜的病毒可以被脂質溶劑快速破壞,例如氯仿或脫氧膽酸鈉可以使它失活病毒。實際上,病毒對脂質溶劑的敏感性可用于檢查病毒是否具有包膜。諸如滲透壓變化,凍結和解凍,熱量和干燥之類的物理因素可能會損壞外殼。一般認為,呼吸道感染病毒對干燥的抵抗力較弱,并且傳播主要是直接的人感染,這是由于包膜引起的。
      2、病毒蛋白質變性:可使蛋白質變性的化學試劑可以使病毒失活,例如酚,次氯酸鹽,酸和堿等。。加熱引起的變性也是一種有效的滅活方法。一般而言,該病毒對熱的抵抗力較弱,并且在60°C的幾分鐘內,該病毒的傳染性顯著降低。因此,當分離出病毒時,從患者身上采集的標本需要在低溫下保存,并迅速送到實驗室,并在-80下保存以進行長期保存。低于°C的低溫條件。
      3、病毒核酸損傷:諸如y射線之類的電離輻射會切斷核酸,紫外線會導致核苷酸鏈上相鄰的嘧啶堿基形成二聚體,從而破壞病毒基因的功能。另外,染料如as啶橙或中性紅可以與病毒核酸結合,暴露于光下可以分解核酸并使滅活的漿果失活。
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